Funkcjonalne powiązanie genetyczne między różnymi zaburzeniami rozwojowymi ad 5

W każdym miejscu wiązanie może zostać przerwane przez mutację trzech rdzeniowych nukleotydów rozpoznawanych sekwencji (CAAATT . CGGGTT), z bardziej dramatycznymi efektami obserwowanymi dla miejsca 5 . Testy z pełną konkurencją dla tego miejsca wykazały wysoce wydajne i specyficzne wiązanie przez FOXP2 (Figura 1B). Rycina 2. Rycina 2. Analizy wpływu FOXP2 na ekspresję neuronalną CNTNAP2. Panel A pokazuje regulację ekspresji CNTNAP2 przez FOXP2 w ludzkich neuronopodobnych komórkach. Ekspresję informacyjnego RNA (mRNA) oceniano za pomocą ilościowej PCR z odwrotną transkryptazą w komórkach SH-SY5Y. Komórki trwale transfekowano konstruktem eksprymującym FOXP2 (komórki FOXP2-dodatnie) lub z pustym wektorem kontrolnym, który nie zawiera insertu genu (komórki kontrolne). Poziomy mRNA CNTNAP2 w tych komórkach były odwrotnie proporcjonalne do FOXP2. Wyniki były spójne dla trzech zestawów par starterów rozpoznających wyraźne kombinacje egzonów CNTNAP2 (startery od A do C). Zmiany ekspresji są podane jako średnie wartości wyrażania log2 w komórkach FOXP2-dodatnich, w porównaniu z pustymi kontrolami, znormalizowanymi dla równej ekspresji kontroli wewnętrznej, GAPDH. Paski I reprezentują błędy standardowe. Wartości P obliczono za pomocą dwustronnych niesparowanych testów t. Panel B pokazuje nienakładającą się ekspresję mRNA dla CNTNAP2 i FOXP2 w ludzkiej korze płodowej. Sąsiednie sekcje ludzkiego mózgu płodu (w wieku 18-22 tygodni) poddano obróbce w celu hybrydyzacji in situ, zanurzono w emulsji filmowej i wizualizowano za pomocą mikroskopii w ciemnym polu. Wewnątrz kory mózgowej obserwuje się najwyższe poziomy mRNA CNTNAP2 między pasmami ekspresji FOXP2, przypuszczalnie wewnątrz warstw II i III płytki korowej (podpanel a). W przeciwieństwie do tego, FOXP2 występuje w dużych ilościach w strefie molekularnej, głębokich warstwach płytki korowej i płytce podrzędnej (podpanelu b). Laminowanie korowe zaznaczono na obrazku o jasnym polu przekroju poplamionego fioletem krezylowym (podpanel c). Nonoverlapping wzory ekspresji dla CNTNAP2 i FOXP2 są schematycznie w subpanelu d. CP oznacza płytkę korową, strefę molekularną MZ i płytkę SP.
Następnie użyliśmy ilościowego RT-PCR, aby bezpośrednio sprawdzić, czy modulacja poziomów białka FOXP2 może spowodować zmianę ekspresji CNTNAP2. Rzeczywiście, poziomy informacyjnego RNA CNTNAP2 były konsekwentnie i znacząco zmniejszone w komórkach podobnych do neuronów, które były stabilnie transfekowane FOXP2, w porównaniu z próbkami kontrolnymi transfekowanymi pozornie (Figura 2A).
Niedawna analiza genomewidów różnicowej ekspresji genu w rozwijającej się ludzkiej korze mózgowej niezależnie uwypukliła CNTNAP2 jako gen z zasadniczym wzbogaceniem w przednią istotę szarej, która jest głównie ograniczona do regionu pomiędzy zakrętem orbitalnym a wyższym czołem, obejmującym dolną i środkową czoło gyri.34 Ponieważ FOXP2 ulega ekspresji także w rozwijającej się korze ludzkiej, 16, 34, 35 przeprowadziliśmy analizy ekspresji tej struktury w tkance płodowej (18 do 22 tygodni ciąży) przez hybrydyzację in situ. Obserwowaliśmy komplementarne wzorce w odniesieniu do laminacji korowej: ekspresja CNTNAP2 była najniższa w warstwach, które wykazały najwyższy poziom FOXP2 (Figura 2B). Te wyniki in vivo są zgodne z naszymi danymi z modeli neuronowych, wspierającymi negatywną regulację ekspresji ludzkiego CNTNAP2 przez FOXP2.
Analizy powiązań z CNTNAP2
W kilku badaniach podkreślono, że CNTNAP2 jest szczególnie atrakcyjnym genem kandydującym do testowania pod kątem powiązania z określonym zaburzeniem językowym
[patrz też: stomatolog opole, stomatolog bielsko biała, stomatolog piaseczno ]

Powiązane tematy z artykułem: stomatolog bielsko biała stomatolog opole stomatolog piaseczno