Funkcjonalne powiązanie genetyczne między różnymi zaburzeniami rozwojowymi ad

Na przykład badanie epidemiologiczne wykazało, że tylko około 5 do 8% dzieci z uporczywym upośledzeniem określonego języka miało znaczące opóźnienie mowy.13 Ponadto, analizy FOXP2 u osób z typowymi postaciami specyficznego zaburzenia mowy nie wykryły mutacji etiologicznych ani dowodów asocjacja.14,15 Mutacja samego FOXP2 jest zatem mało prawdopodobnym czynnikiem ryzyka upośledzeń językowych. Rzeczywiście, do tej pory nie znamy żadnego doniesienia o genie związanym z typowym zaburzeniem określonego języka Ponieważ FOXP2 koduje neuronowo wyrażony czynnik transkrypcyjny, 16, 17, my myśleliśmy, że jeden lub więcej genów, które reguluje w mózgu, może być zaangażowany we wspólne fenotypy związane z językiem. Tutaj opisujemy izolację nowatorskiego celu regulowanego FOXP2 za pomocą funkcji neuronalnych i dostarczamy dowodów na jego związek z deficytami językowymi w dużym zestawie dobrze scharakteryzowanych rodzin z konkretnymi zaburzeniami mowy.
Metody
Badanie dla celów FOXP2
Zaprojektowaliśmy linię komórkową ludzkiego nerwiaka zarodkowego SH-SY5Y do stabilnej ekspresji FOXP218, a następnie, stosując tę transfekowaną linię komórkową, przeprowadziliśmy bezstronny przegląd dla miejsc genomowych związanych przez białko FOXP2. Wymagało to zastosowania immunoprecypitacji chromatyny z przeciwciałami anty-FOXP2, a następnie sekwencjonowania oczyszczonego DNA metodą shotgun, procesu losowego klonowania fragmentów DNA, a następnie określenia ich sekwencji (szczegółowe informacje znajdują się w Dodatku uzupełniającym, dostępnym wraz z pełnym tekstem tego artykuł na www.nejm.org). Określiliśmy pozycje sekwencji DNA, które wyizolowano za pomocą immunoprecypitacji chromatyny, stosując BLAT na Uniwersytecie Kalifornijskim, Santa Cruz, Genome Server (http://genome.ucsc.edu/), co umożliwiło identyfikację przypuszczalnych genów docelowych.
Walidacja wiązania i regulacji przez FOXP2
Wiązanie FOXP2 z miejscami docelowymi zostało niezależnie zweryfikowane i dalej zlokalizowane za pomocą półilościowego testu reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) chromatyny izolowanej z dodatkowych eksperymentów immunoprecypitacji chromatyny i testów zmiany ruchliwości elektroforetycznej (EMSA), zgodnie z wcześniej opisanymi protokołami. 18 Regulacja domniemanych genów docelowych została oceniona za pomocą ilościowego PCR z odwrotną transkryptazą (RT-PCR) RNA wyekstrahowanego z komórek SH-SY5Y wyrażających różne poziomy FOXP2, jak opisano wcześniej18 (patrz Tabela S1 w Dodatkowym dodatku dla sekwencji starterów) . Przeprowadzono hybrydyzację in situ na ludzkich mózgach płodu, 19 jak opisano w rozdziale Metody w dodatkowym dodatku.
Osoby badane
Badani byli członkami rodzin potwierdzonych epidemiologicznie i klinicznie zidentyfikowanych przez konsorcjum zaburzeń określonego j ego20,21. Rodziny te zostały zwerbowane z czterech miejsc w Wielkiej Brytanii: Newcomen Center w Guy s Hospital, 20,21 Cambridge Language and Speech Project. 22, Departament ds. Życia i Zdrowia Dziecka na Uniwersytecie w Edynburgu, 23 i Studium Języków Obcych w Manchesterze24. Rodziny zostały wybrane przez proband z konkretnym upośledzeniem mowy, którego przeszłe lub obecne umiejętności językowe były o 1,5 SD lub więcej niższe od normy normatywnej dla wieku dziecka Kliniczna ewaluacja podstaw językowych – poprawiona skala (CELF-R), 25 narzędzie, które jest rutynowo wykorzystywane do diagnozowania i oceny następczej zaburzeń mowy u dzieci w wieku szkolnym
[hasła pokrewne: maść pimafucort, dyżury aptek grodzisk wlkp, dentysta rzeszów cennik ]

Powiązane tematy z artykułem: dentysta rzeszów cennik dyżury aptek grodzisk wlkp maść pimafucort